Qu’est-ce que la méthode ELISA ?
ELISA est une méthode d’analyse qualitative et quantitative des protéines telles que les antigènes et les anticorps présents dans des solutions liquides. ELISA est l’abréviation de “Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay” et est un type d’essai immunologique. ELISA utilise la spécificité des antigènes et des anticorps et constitue une méthode très précise pour les analyses qualitatives et quantitatives.
La technique ELISA est largement utilisée pour l’analyse quantitative des antigènes et des anticorps, car des kits commerciaux sont disponibles. En général, le contrôle de la température est important pour les kits ELISA, il faut donc veiller à ce que les kits ne soient pas congelés à des températures extrêmement différentes ou trop froids dans le réfrigérateur où ils sont conservés.
Selon la méthode, les méthodes ELISA peuvent nécessiter davantage d’étapes avant de pouvoir effectuer une analyse quantitative, mais des appareils de mesure entièrement automatisés ont récemment été mis au point, ce qui permet de réduire le temps nécessaire à l’analyse.
Utilisations des méthodes ELISA
Les méthodes ELISA sont souvent utilisées pour des analyses dans le domaine de la biotechnologie. L’analyse des antigènes et des anticorps dans le sang, comme le plasma et le sérum, en est un exemple. En prélevant des échantillons de sang et en mesurant les valeurs des auto-anticorps, il est possible de diagnostiquer des maladies et de déterminer les titres d’anticorps issus de la vaccination. Cette méthode est donc largement utilisée dans l’analyse des tests sanguins effectués dans les hôpitaux, et des recherches ont récemment montré qu’un nombre croissant de maladies peuvent être identifiées par la méthode ELISA.
Elle peut également être utilisée pour déterminer la présence ou l’absence d’allergènes dans les aliments, ou pour déterminer la présence ou l’absence d’allergies alimentaires en prélevant des échantillons de sang sur le sujet.
La méthode PCR utilisant l’ADN s’est imposée comme test de détection des antigènes et des anticorps du coronavirus, mais l’analyse ELISA est également disponible sous forme de kits et sous d’autres formes.
Principe de la méthode ELISA
La méthode ELISA utilise une réaction antigène-anticorps pour l’analyse.
Tout d’abord, l’antigène à analyser est combiné à un anticorps spécifique de l’antigène. Pour détecter l’anticorps lié, un anticorps marqué par une enzyme spécifique est ensuite lié.
L’antigène, l’anticorps et l’analyte lié à l’enzyme sont ensuite mélangés à un substrat qui réagit avec l’enzyme pour produire un changement de couleur. La teinte change en fonction de la quantité de la substance à analyser et le spectre d’absorption est mesuré à l’aide d’un spectrophotomètre d’absorption pour une analyse quantitative et qualitative.
Les anticorps IgG sont souvent utilisés dans les méthodes de dosage immunologique, notamment ELISA.
Les méthodes ELISA
Il existe en réalité plusieurs méthodes ELISA et différents types de kits sont disponibles. La méthode directe la plus simple est présentée ici. Le déroulement de la mesure n’est pas très différent de celui des autres méthodes.
Tout d’abord, un anticorps qui se lie à la substance à mesurer est adsorbé sur une microplaque.
Une quantité définie d’échantillon liquide est ajoutée à la microplaque à l’aide d’une pipette de distribution. La température est contrôlée dans un incubateur et l’échantillon peut réagir et se lier aux antigènes et aux anticorps présents dans l’échantillon liquide et sur la microplaque. Les anticorps en excès sont également éliminés par lavage.
Les anticorps liés réagissent ensuite avec des enzymes spécifiques. Pour détecter l’activité enzymatique, un substrat ayant un spectre d’absorption différent lorsqu’il est lié à l’enzyme est ajouté et le spectre d’absorption est mesuré et analysé après la réaction. Le substrat est souvent la peroxydase dérivée du raifort (HRP), qui est utilisée pour produire une couleur. Lors de l’utilisation de la HRP, il faut veiller à ne pas utiliser de tubes de prélèvement sanguin recouverts d’azide de sodium ou d’autres inhibiteurs afin d’éviter toute contamination.
Enfin, le spectre d’absorption est mesuré et analysé à l’aide d’un spectrophotomètre d’absorption.
Le matériel ELISA
La méthode ELISA nécessite souvent un certain nombre d’étapes pour une analyse précise, en fonction de la substance d’intérêt, et chaque étape est répétée, comme l’aliquotage et le lavage. Des pipettes, des microplaques, des incubateurs et des analyseurs d’absorbance sont également nécessaires.
Récemment, des équipements ont été mis au point pour permettre à une seule unité de remplir toutes les fonctions, du pipetage à l’analyse d’absorbance. La possibilité d’effectuer des mesures de manière entièrement automatique, sans intervention humaine, réduit les erreurs et permet d’économiser du temps et des efforts.