Qu’est-ce qu’un hématimètre ?
Un hématimètre, également appelé “hémocytomètre”, est un outil qui sert à compter les cellules. Il est utilisé à cette fin car le comptage des cellules est nécessaire avant des tâches, telles que les techniques de fusion cellulaire ou les opérations de culture cellulaire.
La taille des cellules dépend de l’objet à mesurer, par exemple les cellules sanguines telles que les globules rouges et blancs, les lymphocytes ou d’autres cellules cultivées. C’est pourquoi l’intervalle d’échelle du calculateur de cellules sanguines est également différent selon les objets.
Utilisations des hématimètres
Les hématimètres sont utilisés dans la recherche et le développement de technologies liées aux cellules. En calculant le nombre de cellules, il est possible d’aussi calculer diverses valeurs nécessaires telles que la densité cellulaire et les taux de survie. Ils sont aussi employés comme étape préliminaire dans les opérations de culture cellulaire telles que la transfection, la technologie de fusion cellulaire et la cryoconservation.
Principe de l’hématimètre
L’hématimètre comporte une série de graduations régulièrement espacées avec différentes largeurs d’incrément. C’est ainsi que les valeurs numériques peuvent être calculées en utilisant les graduations de chaque largeur. La concentration de la suspension est ajustée de manière à ce qu’il y ait environ 100 cellules dans un cadre de 1 mm de côté, et le nombre de cellules vivantes dans un cadre composé de 16 carrés est compté.
Utilisations de l’hématimètre et du verre de couverture
1. Hématimètre
Tout d’abord, les cellules à observer sont prélevées et remises en suspension dans le milieu. À partir de ce dernier, la suspension cellulaire est colorée à l’aide d’un colorant permettant de classer les cellules vivantes et les cellules mortes. Les cellules mortes sont colorées mais les vivantes ne le sont pas. Par conséquent, la présence ou l’absence de couleur sert à distinguer les cellules vivantes des cellules mortes.
Il est important d’ajuster la concentration de la suspension à un niveau approprié afin qu’il y ait environ 100 cellules dans le cadre. Une suspension trop concentrée est difficile à mesurer et une trop diluée ne peut être mesurée correctement. Au départ, on compte le nombre de cellules vivantes dans le plus grand cadre carré de 1 mm de côté composé de 16 carrés. Si ce nombre est trop important, l’échelle utilisée est réduite en fonction de la taille des cellules.
En mesurant le nombre de cellules vivantes et mortes par cette opération, la viabilité cellulaire peut être calculée.
2. Verre de couverture
L’hématimètre est utilisé avec un verre de couverture en contact étroit. Ce dernier doit être lavé avec de l’éthanol, puis séché à l’air avant la manipulation. Juste avant l’utilisation, il faut légèrement l’humidifier avec de l’eau et le placer sur la surface de la balance de l’hématimètre. Tout en veillant à ne pas casser le verre, exercez une légère pression, comme si vous le frottiez avec vos doigts, pour le faire adhérer à la planche de comptage des cellules sanguines.
À ce stade, vérifiez la présence d’anneaux de Newton pour vous assurer que le verre est bien collé. Les anneaux de Newton sont des franges d’interférence aux couleurs de l’arc-en-ciel qui apparaissent lorsque l’on superpose des verres dont la surface présente la même courbe de pourcentage. Ils ne sont pas visibles si de la poussière ou d’autres contaminants ont pénétré entre le panneau de calcul sanguin et le verre de couverture.
Si ces anneaux ne peuvent pas être confirmés, essuyez la surface de la balance du tableau de calcul des cellules sanguines et le verre de couverture. Pour ce faire, utilisez une gaze ou un chiffon similaire contenant une quantité appropriée d’éthanol, puis vérifiez à nouveau de la même manière. Notez que la profondeur de la chambre de calcul varie en fonction de la saleté qui s’y trouve et qu’il n’est pas possible d’effectuer un comptage précis.
Certains produits jetables ne nécessitent pas de verre de couverture. Dans ce cas, il est possible d’éviter de créer des anneaux de Newton.
Types d’hématimètres
1. L’hématimètre de type Birkertürk
Il existe plusieurs types d’hématimètres, chacun ayant une inscription différente sur l’échelle et une profondeur de chambre de calcul différente. Le plus couramment utilisé est l’hématimètre de Burker-Turk.
Il s’agit d’un hématimètre duplex à deux chambres de calcul qui peut compter une large gamme de cellules, y compris les globules rouges et blancs, ainsi que les spermatozoïdes, les bactéries, les levures, le plancton et les cellules cultivées. Dans le calculateur de cellules sanguines de type Birkertürk, chaque chambre de calcul a un volume de 0,9 µL. De plus, les lignes de l’échelle sont conçues de manière à ce que chaque côté de l’échelle ait une longueur et une largeur de 3 mm.
Ce côté unique est ensuite divisé en neuf blocs de 1 mm x 1 mm. Parmi ceux-ci, celui du milieu est principalement utilisé pour compter les cellules dont le nombre absolu est élevé, comme les globules rouge. Les blocs situés aux quatre coins, quant à eux, servent à compter les cellules dont le nombre absolu est relativement faible, comme les globules blancs et les cellules cultivées.
2. Autres hématimètres
Parmi les autres types d’hématimètres, l’on peut citer le type Thoma, l’hématimètre à une chambre et à un étage, ainsi le type Neubauer modifié. Il s’agit d’un hématimètre similaire au type Birkertürk, mais avec des lignes de graduation plus simples.