¿Qué es un Lector de Microplacas?
Es un dispositivo que puede medir simultáneamente la absorbancia de múltiples muestras inyectadas en una microplaca. El número de muestras depende del número de pocillos de la microplaca, pero en general se pueden medir simultáneamente docenas o más muestras, lo que puede mejorar significativamente la eficacia del trabajo. Se utilizan para la investigación y la cuantificación en química y biología, sobre todo para la cuantificación de proteínas. Aunque se espera que mejore la eficiencia del trabajo, tiene la desventaja de que es probable que se produzcan errores debido a las diminutas cantidades que se miden.
Usos de los Lectores de Microplacas
Se utilizan en química y biología para cuantificar proteínas y medir las tasas de crecimiento celular. Otras aplicaciones incluyen la medición de concentraciones mediante la reacción en color y la polarización de fluorescencia, que puede realizarse de forma segura sin utilizar sustancias radiactivas. Se utilizan sobre todo cuando se maneja un gran número de muestras a la vez, lo que contribuye a mejorar la eficacia del trabajo y a reducir la carga del investigador. Además, las mediciones de absorbancia suelen requerir un tratamiento previo y a menudo implican reacciones en microplacas.
Principios de los Lectores de Microplacas
Pueden utilizarse para mediciones de absorbancia y fluorescencia, cada una de las cuales tiene principios de medición, características y precauciones diferentes, por lo que se dividen en dos categorías.
- Medición de la Absorbancia
El principio de medición de la absorbancia, que se utiliza con frecuencia, es sencillo. La absorbancia se determina irradiando la muestra en la microplaca con luz de una longitud de onda arbitraria y midiendo la intensidad de la luz transmitida a través de la muestra en la dirección opuesta. Una vez determinada la absorbancia, la muestra puede utilizarse para la calibración y la concentración de la muestra puede determinarse mediante la ley de Lambert-Baer. Sin embargo, si la microplaca está rayada o contaminada, o si entran burbujas de aire en la muestra, no se puede medir la absorbancia correcta y puede ser mayor que el valor original. - Medición de la Fluorescencia
Se irradia luz sobre la muestra utilizando un filtro que corta longitudes de onda específicas, y se mide la intensidad de la luz en la banda de longitud de onda larga reflejada. Esto se basa en la propiedad de los materiales fluorescentes de absorber una banda de longitud de onda específica, cambiar a un estado excitado y liberar energía al volver a su estado básico. Esta energía se libera en forma de calor y luz, lo que significa que debe detectarse la luz. Dado que se detecta la fluorescencia de la propia muestra, esta característica permite realizar mediciones muy precisas.