¿Qué es un Hemocitómetro?
Un hemocitómetro es una herramienta utilizada para contar células. . Se utiliza con este fin porque el recuento de células es necesario antes de realizar tareas como las técnicas de fusión celular o las operaciones de cultivo celular.
El tamaño de las células depende del objeto que se vaya a medir, por ejemplo células sanguíneas como glóbulos rojos y blancos, linfocitos u otras células cultivadas. Por este motivo, el intervalo de escala de la calculadora de hemocitómetros también es diferente para los distintos objetos.
Usos de los Hemocitómetros
Las calculadoras de hemocitómetros se utilizan en la investigación y el desarrollo de tecnologías relacionadas con las células. Mediante el cálculo del recuento celular, es posible calcular diversos valores necesarios, como la densidad celular y las tasas de supervivencia. Siempre se utiliza como paso previo en operaciones de cultivo celular como la transfección, la tecnología de fusión celular y la criopreservación.
Principios de los Hemocitómetros
El hemocitómetros tiene una serie de graduaciones equidistantes con diferentes anchuras de incremento, y los valores numéricos pueden calcularse utilizando las graduaciones de cada anchura. La concentración de la suspensión se ajusta de modo que haya unas 100 células en un marco de 1 mm por lado, y se cuenta el número de células vivas en un marco formado por 16 cuadrados.
Cómo Utilizar el Hemocitómetro y el Cubreobjetos
1. Hemocitómetros
En primer lugar, se recogen las células que se van a observar y se resuspenden en el medio, a partir del cual se colorea la suspensión celular con un colorante para clasificar las células vivas y las muertas. Las células muertas son coloreadas, pero las vivas no, por lo que la presencia o ausencia de color se utiliza para distinguir entre células vivas y muertas.
Es importante ajustar la concentración de la suspensión a un nivel adecuado para que haya unas 100 células en el marco, ya que una suspensión demasiado concentrada es difícil de medir y una suspensión demasiado diluida no se puede medir correctamente. Inicialmente, se cuenta el número de células vivas dentro del marco cuadrado más grande de 1 mm de 16 cuadrados, pero si el número de células es demasiado grande, la escala utilizada se reduce en función del tamaño de las células.
Midiendo el número de células vivas y muertas mediante esta operación, se puede calcular la viabilidad celular.
2. Cubreobjetos
El hemocitómetros se utiliza con un cubreobjetos en estrecho contacto. El cubreobjetos debe lavarse con etanol y secarse al aire antes de utilizarlo. Justo antes de utilizarlo, humedézcalo ligeramente con agua y colóquelo sobre la superficie de la escala del hemocitómetros. Con cuidado de no romper el cristal, ejerza una ligera presión como si lo frotara con los dedos para que se adhiera a la superficie de la báscula del hemocitómetros.
En este punto, compruebe la presencia de anillos de Newton para asegurarse de que el cristal está firmemente adherido. Los anillos de Newton son franjas de interferencia de los colores del arco iris que se producen cuando se superponen vidrios con una superficie de la misma curva porcentual. No son visibles si ha penetrado polvo u otros contaminantes entre el panel de hemocitómetros y el cubreobjetos.
Si no pueden verse los anillos de Newton, limpie la superficie de la escala del panel de hemocitómetros y el cubreobjetos con una gasa o paño similar que contenga una cantidad adecuada de etanol, y vuelva a comprobar de la misma forma. Tenga en cuenta que la profundidad de la cámara de cálculo cambiará si hay suciedad en ella y no será posible realizar un recuento preciso.
Algunos productos desechables no requieren un cubreobjetos. En tales casos, puede eliminarse el tiempo y el esfuerzo necesarios para crear los anillos de Newton.
Tipos de Balanzas Hemocitómetros
1. Hemocitómetros de tipo Birkertürk
Existen varios tipos diferentes de Hemocitómetros, cada uno con una inscripción de escala y una profundidad de cámara de cálculo diferentes. El tipo más utilizado es el hemocitómetros de Burker-Turk.
Es una calculadora dúplex con dos cámaras de cálculo y puede contar una amplia gama de células, incluidos glóbulos rojos y blancos, así como espermatozoides, bacterias, levaduras, plancton y células cultivadas. En la calculadora de hemocitómetros tipo Birkertürk, cada cámara de cálculo tiene un volumen de 0,9 µl y las líneas de la escala están diseñadas de forma que cada lado de la escala mide 3 mm tanto de largo como de ancho.
Este único lado se divide a su vez en nueve bloques de 1 mm x 1 mm. De ellos, el bloque central se utiliza principalmente para el recuento de células con un número absoluto elevado, como los glóbulos rojos, mientras que los bloques de las cuatro esquinas se utilizan para el recuento de células con un número absoluto relativamente bajo, como los glóbulos blancos y las células cultivadas.
2. Otros Hemocitómetros
Otros tipos de hemocitómetros son el tipo Thoma, que es una calculadora de una sola cámara y una sola etapa, y el tipo Neubauer modificado, que es una calculadora de doble etapa similar al tipo Birkertürk, pero con líneas de graduación más sencillas.