¿Qué es una Placa PCR?
Una placa PCR es un dispositivo experimental de plástico que se utiliza como recipiente de reacción al realizar experimentos PCR. La muestra se coloca en los pocillos (orificios) y se lleva a cabo la reacción PCR.
En comparación con los tubos de PCR, las placas de PCR se utilizan para experimentos a mediana y gran escala con un número relativamente grande de muestras, y están disponibles en varios tamaños, formas y colores, como placas de 32 pocillos, placas de 48 pocillos, placas de 96 pocillos y placas de 384 pocillos. Otra característica de las placas es que pueden utilizarse en procesos automatizados.
Usos de las Placas PCR
PCR es el acrónimo de reacción en cadena de la polimerasa, una técnica que utiliza la ADN polimerasa para amplificar una secuencia de ADN diana de uno a varios millones de copias en poco tiempo. Concretamente, la serie de reacciones 1-3 que se indican a continuación se denominan “ciclos” y se repiten durante 25-35 ciclos.
Desnaturalización: la plantilla de ADN de doble cadena se calienta para separar las cadenas de ADN.
Recocido: moléculas cortas de ADN, denominadas cebadores, se unen a las regiones vecinas del ADN diana.
Elongación: el ADN polimerasa sintetiza la cadena complementaria del molde partiendo de cada cebador hacia el extremo 3′.
En el PCR, el dispositivo utilizado para controlar automáticamente el ciclo de temperatura y el tiempo de incubación es el termociclador. Para seleccionar la placa de PCR correcta, es necesario conocer bien las especificaciones del termociclador y del equipo que se está utilizando.
Además, existen varios tipos de PCR, como la PCR estándar, la PCR de gradiente y la PCR/qPCR en tiempo real, y es necesario seleccionar la PCR adecuada para su propósito. Al mismo tiempo, es importante preparar el equipo experimental y los reactivos adecuados según el tipo de experimento.
Estructura de la Placa PCR
1. Estructura de la Sección de Pocillos
Generalmente se utiliza polipropileno como material. El polipropileno es químicamente inerte y, por lo tanto, soporta cambios rápidos de temperatura durante los ciclos térmicos, con una absorción mínima de los componentes de la reacción. Para que la transferencia de calor sea eficaz, las paredes de los tubos se fabrican para que sean uniformes y finas. Los pocillos están disponibles en colores transparente, translúcido y blanco.
Durante la producción se proporciona un entorno de fabricación limpio para evitar el polvo y las impurezas como endonucleasas, pirógenos y ADN. Esto se debe a que si el producto se contamina durante la producción, las impurezas pueden permanecer e inhibir la PCR, o los fragmentos de ADN pueden servir como plantillas para la amplificación no específica, lo que resulta en una menor precisión experimental.
2. Estructura de la Sección de la Placa
Las placas vienen en una variedad de tamaños, incluyendo placas de 32 pocillos, 48 pocillos, 96 pocillos y 384 pocillos; algunas placas de 96 pocillos pueden dividirse en 24 pocillos cada una (raramente 8 pocillos o 32 pocillos). Los marcos también están disponibles en varios colores, y pueden utilizarse distintos colores para facilitar el seguimiento si se utilizan varias placas al mismo tiempo.
Los faldones son paneles que rodean la placa y pueden tener forma no faldada, semifaldada o faldada completa. La zona que rodea la superficie de la placa también se conoce como cubierta, que puede ser plana o elevada. El tratamiento mecanizado en las esquinas de la placa se denomina muescas.
El sellado se realiza con tapones o láminas. Es importante seleccionar una placa en función de su tamaño, el número de muestras y la frecuencia de apertura y cierre.
Cómo Elegir una Placa PCR
1. Sección de Pocillos
En primer lugar, es importante elegir en función del tipo de experimento. Por ejemplo, los productos con pocillos transparentes facilitan la comprobación del contenido, mientras que los productos blancos aumentan la sensibilidad de la qPCR, ya que impiden que la fluorescencia se refracte y difunda fuera de los pocillos.
También es importante utilizar pocillos cuyo volumen coincida con el volumen de la solución de reacción. Si el volumen de la solución de reacción es demasiado grande, existe el riesgo de una transferencia de calor inadecuada o de fugas de la solución de reacción, mientras que si el volumen de la solución de reacción es insuficiente, puede producirse la evaporación de la solución de reacción o la pérdida de la muestra. En general, los volúmenes de los pocillos suelen ser de 0,2 mL o 0,1 mL para placas de 96 pocillos y de 0,02 mL para placas de 384 pocillos.
También es importante utilizar el adecuado para el termociclador u otro equipo que esté utilizando. Existen dos tipos de altura de pocillos, uno con una altura normal (perfil estándar) y otro con una altura inferior (perfil bajo). Los productos de perfil bajo son compatibles con los bloques térmicos Fast. También tienen un área de espacio menor y, por tanto, una conductividad térmica mayor.
2. Forma de la Placa
La elección debe hacerse en función de las especificaciones del termociclador u otro equipo que vaya a utilizarse. En particular, si el equipo se va a automatizar mediante una plataforma robotizada, debe elegirse de forma que se adapte a la aplicación.
Por ejemplo, las placas semi-faldón y las de faldón completo tienen laterales para que puedan ser agarradas por pinzas robóticas y, además, se les pueden colocar códigos de barras para su registro y seguimiento en experimentos de alto rendimiento. También es necesario elegir placas para automatización que estén construidas con marcos de policarbonato resistentes.
Esto se debe a que deben soportar las fuerzas ejercidas por la pinza robótica y el calentamiento y enfriamiento rápidos. En estas placas, además, las secciones de los pocillos deben ser de polipropileno uniforme y fino para que la transferencia de calor a la solución de reacción sea eficaz.
El diseño de cubierta plana es compatible con la mayoría de los termocicladores, pero las cubiertas elevadas son adecuadas para algunos termocicladores e instrumentos. Las posiciones adecuadas de las muescas también varían en función del instrumento utilizado.
Existen dos tipos de letras para indicar la ubicación de los pocillos: letras en relieve y letras grabadas. Mientras que las letras en relieve son más fáciles de ver, las letras grabadas son más adecuadas para la automatización, ya que garantizan un sellado fiable de la periferia.