¿Qué es ELISA?
ELISA es un método para el análisis cualitativo y cuantitativo de proteínas como antígenos y anticuerpos presentes en soluciones líquidas. ELISA es la abreviatura de Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay y es un tipo de ensayo inmunológico. ELISA utiliza la especificidad de antígenos y anticuerpos y es un método muy preciso para el análisis cualitativo y cuantitativo.
ELISA se utiliza ampliamente para el análisis cuantitativo de antígenos y anticuerpos, ya que existen kits comerciales. En general, el control de la temperatura es importante para los kits de ELISA, por lo que se debe tener cuidado de que los kits no se congelen a temperaturas extremadamente diferentes o se enfríen demasiado en el frigorífico donde se almacenan.
Dependiendo del método, los métodos ELISA pueden requerir más pasos antes de poder realizar el análisis cuantitativo, pero recientemente se han desarrollado dispositivos de medición totalmente automatizados que reducen el tiempo necesario para el análisis.
Usos de los ELISA
Los ELISA se utilizan a menudo para análisis en el campo de la biotecnología. Un ejemplo es el análisis de antígenos y anticuerpos en sangre, como plasma y suero. Mediante la recogida de muestras de sangre y la medición de los valores de autoanticuerpos en ELISA, se pueden diagnosticar enfermedades y determinar los títulos de anticuerpos de la vacunación. Por lo tanto, ELISA se utiliza ampliamente en el análisis de los análisis de sangre que se realizan en los hospitales, y las investigaciones han demostrado recientemente que cada vez es mayor el número de enfermedades que pueden identificarse mediante ELISA.
También puede utilizarse para determinar la presencia o ausencia de alérgenos en los alimentos, o para determinar la presencia o ausencia de alergias alimentarias tomando muestras de sangre del sujeto.
El método PCR que utiliza ADN se ha hecho muy conocido como prueba para antígenos y anticuerpos de coronavirus, pero el análisis ELISA también está disponible en kits y otras formas.
Principio de ELISA
ELISA utiliza una reacción antígeno-anticuerpo para el análisis.
En primer lugar, el antígeno que se va a analizar se combina con un anticuerpo que tiene especificidad para el antígeno. Para detectar el anticuerpo unido, se une además un anticuerpo marcado con una enzima específica.
A continuación, el antígeno, el anticuerpo y el analito unido a la enzima se mezclan con un sustrato que reacciona con la enzima para producir un cambio de color. El tono de color cambia en función de la cantidad de la sustancia que se desea analizar, y el espectro de absorción se mide con un espectrofotómetro de absorbancia para realizar un análisis cuantitativo y cualitativo.
Los anticuerpos IgG se utilizan a menudo en métodos de ensayo inmunológicos, incluido el ELISA.
Métodos ELISA
Existen varios métodos ELISA y diferentes tipos de kits disponibles. Aquí se presenta el método directo más sencillo. El flujo básico de la medición no difiere mucho de los demás.
En primer lugar, se adsorbe en una microplaca un anticuerpo que se une a la sustancia que se va a medir.
Se añade una cantidad definida de muestra líquida a la microplaca utilizando una pipeta dispensadora. La temperatura se controla en una incubadora y se deja que la muestra reaccione y se una a los antígenos y anticuerpos de la muestra líquida y de la microplaca. También se lava el exceso de anticuerpos.
Los anticuerpos unidos se hacen reaccionar con enzimas específicas. Para detectar la actividad enzimática, se añade un sustrato con un espectro de absorción diferente cuando se une a la enzima y el espectro de absorción se mide y analiza después de la reacción. El sustrato suele ser peroxidasa derivada del rábano picante (HRP), que se utiliza para generar un color; cuando se utiliza HRP, hay que tener cuidado de no utilizar tubos de recogida de sangre recubiertos con azida sódica u otros inhibidores para evitar la contaminación.
Por último, se mide y analiza el espectro de absorción utilizando un espectrofotómetro de absorbancia.
Equipo de ELISA
ELISA suele requerir varios pasos para un análisis preciso, en función de la sustancia de interés, y cada paso se repite, como el alicuotado y el lavado. También se necesitan pipetas, microplacas, incubadoras y analizadores de absorbancia.
Recientemente se han desarrollado equipos que permiten que una sola unidad desempeñe todas las funciones, desde el pipeteado hasta el análisis de absorbancia. La posibilidad de realizar mediciones de forma totalmente automática, sin intervención humana, reduce los errores y ahorra tiempo y esfuerzo.