Qu’est-ce qu’un kit Elisa ?
Les kits Elisa sont un type d’essai immunologique basé sur les anticorps pour la quantification par Elisa, Enzyme Linked Immunosolvent Assay.
Elisa est une méthode pour quantifier des traces de substa
Utilisations des kits Elisa
Les kits Elisa sont souvent utilisés dans le domaine de la biologie dans la mesure où des quantités infimes de substances biologiques peuvent être détectées avec une grande précision par des réactions antigène-anticorps. Par exemple, ils sont utilisés pour mesurer les protéines sanguines telles que les cytokines, les chimiokines et les facteurs de croissance, ou en immuno-oncologie pour mesurer les molécules solubles des points de contrôle immunitaire afin de déterminer l’état de l’immunité contre le cancer.
En neurobiologie, il est utilisé pour quantifier les protéines Aβ, tau et α-synucléine, connues pour être à l’origine de neuropathies. D’autres kits Elisa peuvent être sélectionnés dans notre vaste gamme, notamment des kits Elisa spécifiques à la phosphorylation et des kits Elisa d’immunoglobulines, en fonction de la nature et de l’objectif de la recherche. L’analyse Elisa de type compétitif est également appropriée pour mesurer l’histamine, les pesticides et les dioxines.
Principe des kits Elisa
Dans un test Elisa, l’on utilise un anticorps ou une substance antigénique qui se lie spécifiquement à la substance à mesurer (réaction antigène-anticorps). Enfin, un anticorps, ou antigène, marqué par une enzyme est utilisé pour détecter et évaluer l’activité enzymatique par mesure de l’absorbance.
La mesure de l’activité enzymatique permet de quantifier la concentration de l’enzyme en solution, les substances contenues dans les réactifs impliqués dans la réaction antigène-anticorps et la substance d’intérêt. Il existe quatre méthodes principales : directe, indirecte, sandwich et compétitive.
1. Méthode directe
Il s’agit d’une méthode dans laquelle la substance antigénique cible, ou l’anticorps cible, est en phase solide sur une microplaque et l’antigène ou l’anticorps marqué agit directement sur elle. Une fois que l’antigène ou l’anticorps a agi sur la microplaque, celle-ci est lavée et l’activité enzymatique sur la microplaque est détectée. Comme aucun anticorps secondaire n’est nécessaire, cette méthode peut être réalisée en une seule étape et en peu de temps.
2. Méthode indirecte
Tout d’abord, un anticorps spécifique de l’antigène concerné est appliqué à un antigène cible en phase solide sur la microplaque. L’anticorps réagit ensuite avec un anticorps secondaire marqué par une enzyme. Enfin, l’activité de l’enzyme sur l’anticorps secondaire marqué est détectée. Cette méthode se caractérise par une sensibilité accrue, mais nécessite plus de temps que la méthode directe.
3. Méthode sandwich
Une microplaque recouverte d’un anticorps qui se lie à la substance cible dans l’échantillon est utilisée pour réagir avec l’échantillon en tant qu’antigène. L’échantillon réagit ensuite avec un autre anticorps marqué par une enzyme, l’excès d’anticorps est éliminé par lavage. L’activité enzymatique sur la microplaque est mesurée.
Les anticorps utilisés pour la solidification et l’anticorps marqué par l’enzyme doivent avoir des sites de reconnaissance de l’antigène différents. L’avantage de la méthode sandwich est de présenter une spécificité de réaction plus élevée que celle de la méthode directe, ce qui se traduit par une plus grande précision de détection.
4. Méthode concurrentielle
Un anticorps qui se lie à la substance cible est en phase solide et interagit simultanément avec un antigène marqué de concentration connue et avec l’échantillon. Si l’échantillon contient davantage de la substance cible, l’absorbance diminue car il y a moins d’antigène marqué par l’enzyme disponible pour se lier à l’anticorps.
Inversement, si l’échantillon contient moins de la substance cible, l’absorbance augmente parce qu’une plus grande quantité d’antigène marqué par l’enzyme est disponible pour se lier à l’anticorps. La méthode compétitive peut être utilisée pour mesurer de petites molécules difficiles à détecter par la méthode sandwich ou lorsqu’il n’y a qu’un seul site de liaison pour l’anticorps.
Comment choisir un kit Elisa
Comme mentionné ci-dessus, la détection est effectuée à l’aide de réactions antigène-anticorps spécifiques. La première condition préalable est donc d’utiliser un produit qui utilise la bonne combinaison de réactifs pour l’échantillon. De plus, qu’il s’agisse de méthodes directes, indirectes, sandwiches ou compétitives, chacune a ses avantages et ses inconvénients, de sorte qu’il convient de choisir la plus favorable en fonction de l’objectif de la mesure.
La solidification sur les microplaques se fait généralement par interaction hydrophobe ou par liaison covalente, mais il est important de choisir la bonne microplaque en fonction du mode de liaison. De nombreux types sont disponibles, y compris des types hydrophobes et hydrophiles, ainsi que des types traités avec des groupes amino ou carboxyl pour les applications de liaison covalente.