¿Qué es un Kit ELISA?
Kits ELISA son kits para la cuantificación mediante ELISA, uno de los métodos de inmunoensayo (Immunoassay) que utilizan anticuerpos.
ELISA es el acrónimo de Enzyme Linked Immunosolvent Assay, un método para cuantificar trazas de sustancias biológicas mediante reacciones antígeno-anticuerpo. A veces se traduce como inmunoensayo enzimático o ensayo inmunoenzimático, pero no se utiliza habitualmente.
Usos de los Kits ELISA
Los kits ELISA se utilizan a menudo en el campo de la biología desde la perspectiva de que las cantidades traza de sustancias biológicas pueden detectarse con gran precisión mediante reacciones antígeno-anticuerpo. Por ejemplo, se utilizan para medir proteínas sanguíneas como citocinas, quimiocinas y factores de crecimiento, o en inmuno-oncología para medir moléculas solubles de puntos de control inmunitario con el fin de determinar el estado de la inmunidad contra el cáncer.
En neurobiología, se utiliza para cuantificar las proteínas Aβ, tau y α-sinucleína, que se sabe que causan neuropatía. Pueden seleccionarse otros kits ELISA de nuestra amplia gama, incluidos kits ELISA específicos de fosforilación y kits ELISA de inmunoglobulinas, para adaptarlos a la naturaleza y finalidad de su investigación. El análisis ELISA de tipo competitivo también es apropiado para medir histamina, pesticidas y dioxinas.
Principio de los Kits ELISA
En un ELISA se utiliza un anticuerpo o sustancia antigénica que se une específicamente a la sustancia que se desea medir (reacción antígeno-anticuerpo). Por último, se utiliza un anticuerpo (o antígeno) marcado con enzimas para detectar y evaluar la actividad enzimática mediante la medición de la absorbancia.
La medición de la actividad enzimática permite cuantificar la concentración de enzima en solución, las sustancias de los reactivos que intervienen en la reacción antígeno-anticuerpo y la sustancia de interés. Existen cuatro métodos principales: directo, indirecto, sándwich y competitivo.
1. Método Directo
Se trata de un método en el que la sustancia antigénica diana (o el anticuerpo diana) se encuentra en fase sólida en una microplaca y el antígeno o anticuerpo marcado actúa directamente sobre ella. Una vez que el antígeno o el anticuerpo ha actuado sobre la microplaca, se lava y se detecta la actividad enzimática en la microplaca. Como no se necesitan anticuerpos secundarios, puede realizarse en un solo paso y en poco tiempo.
2. Método Indirecto
En primer lugar, se aplica un anticuerpo específico para el antígeno de interés a un antígeno diana en fase sólida en la microplaca. A continuación, el anticuerpo reacciona con un anticuerpo secundario marcado con enzima y, por último, se detecta la actividad enzimática de la enzima sobre el anticuerpo secundario marcado. Se caracteriza por una mayor sensibilidad, pero requiere más tiempo que el método directo.
3.Método Sándwich
Se utiliza una microplaca recubierta con un anticuerpo que se une a la sustancia diana de la muestra para que reaccione con ella como antígeno. A continuación, la muestra reacciona con otro anticuerpo marcado con enzima, se lava el exceso de anticuerpo y se mide la actividad enzimática en la microplaca.
Los anticuerpos utilizados para la solidificación y el anticuerpo marcado con enzimas deben tener sitios de reconocimiento de antígenos diferentes. La ventaja del método sándwich es que la especificidad de la reacción es mayor que la del método directo, lo que se traduce en una mayor precisión de la detección.
4. Método Competitivo
Un anticuerpo que se une a la sustancia diana está en fase sólida e interactúa simultáneamente con un antígeno marcado de concentración conocida y con la muestra. Si la muestra contiene más cantidad de la sustancia diana, la absorbancia disminuye porque hay menos antígeno marcado con enzimas disponible para unirse al anticuerpo.
Por el contrario, si la muestra contiene menos sustancia diana, la absorbancia aumenta porque hay más antígeno marcado con enzimas disponible para unirse al anticuerpo. El método competitivo puede utilizarse para medir moléculas pequeñas que son difíciles de detectar mediante el método sándwich, o cuando sólo hay un sitio de unión para el anticuerpo.
Cómo Elegir un Kits ELISA
Como ya se ha mencionado, la detección se lleva a cabo mediante reacciones antígeno-anticuerpo específicas, por lo que el primer requisito previo es utilizar un producto que emplee la combinación correcta de reactivos para la muestra. Además, ya se trate de métodos directos, indirectos, sándwich o competitivos, cada uno tiene sus ventajas e inconvenientes, por lo que debe seleccionarse el más favorable en función de la finalidad de la medición.
La solidificación en microplacas se produce generalmente por interacción hidrofóbica o unión covalente, pero es importante seleccionar la microplaca correcta según el modo de unión. Hay muchos tipos disponibles, incluidos los hidrófobos e hidrófilos, así como los procesados con grupos amino o carboxilo para aplicaciones de unión covalente.