Qu’est-ce qu’un lecteur de plaques ?
Un lecteur de plaques est un appareil capable de mesurer simultanément l’absorbance de plusieurs échantillons injectés dans une microplaque. Le nombre d’échantillons dépend du nombre de puits à l’intérieur de celle-ci, mais généralement des dizaines d’échantillons ou plus peuvent être mesurés simultanément. Il en résulte une amélioration considérablement l’efficacité du travail. Ils sont utilisés pour la recherche et la quantification en chimie et en biologie, le plus souvent pour la quantification des protéines. Bien qu’ils soient censés améliorer l’efficacité du travail, ils présentent l’inconvénient de provoquer des erreurs. Cela en raison des quantités infimes qui sont mesurées avec cet appareil.
Utilisations des lecteurs de plaques
Les lecteurs de plaques sont utilisés en chimie et en biologie pour quantifier les protéines et mesurer les taux de croissance cellulaire. D’autres utilisations comprennent la mesure de concentrations par réaction colorée et polarisation de fluorescence. Ces dernières peuvent être effectuées en toute sécurité sans utiliser de substances radioactives. Ces lecteurs sont principalement utilisés lors de la manipulation d’un grand nombre d’échantillons à la fois, ce qui contribue à réduire la charge de travail du chercheur. De plus, les mesures d’absorbance nécessitent souvent un prétraitement et impliquent souvent des réactions dans des microplaques.
Principe des lecteurs de plaques
Les lecteurs de plaques peuvent être utilisés pour les mesures d’absorbance et de fluorescence. Chacune d’entre elles a des principes de mesure, des caractéristiques et des précautions différents et sont donc divisés en deux catégories.
- Mesure de l’absorbance
Le principe de la mesure de l’absorbance, fréquemment utilisé, est simple. L’absorbance est déterminée dans un premier temps en irradiant l’échantillon dans la microplaque avec une lumière d’une longueur d’onde arbitraire. Dans un second temps, en mesurant l’intensité de la lumière transmise à travers l’échantillon dans la direction opposée. Une fois l’absorbance déterminée, l’échantillon peut être utilisé pour l’étalonnage et la concentration de l’échantillon peut être déterminée à l’aide de la loi de Lambert-Baer. Toutefois, si la microplaque est rayée ou contaminée, ou si des bulles d’air pénètrent dans l’échantillon, l’absorbance correcte ne peut pas être mesurée et peut être supérieure à la valeur d’origine. - Mesure de la fluorescence
La lumière est irradiée sur l’échantillon à l’aide d’un filtre qui coupe certaines longueurs d’onde. L’intensité lumineuse dans la bande de grande longueur d’onde réfléchie est ensuite mesurée. Cette mesure est basée sur la propriété des matériaux fluorescents d’absorber une bande de longueur d’onde spécifique, de passer à un état excité et de libérer de l’énergie lorsqu’ils reviennent à leur état fondamental. Cette énergie est libérée sous forme de chaleur et de lumière. Cela signifie que la lumière doit être détectée. La fluorescence de l’échantillon étant elle-même détectée, cette caractéristique permet des mesures très précises.